Нашла вот такую интересную статью о новых технологиях на Украине по ИО.
источник Новая технология, созданная в Украине Егоров Максим Игоревич - кинолог со стажем в 14 лет. Работать с собаками начал незадолго до армии с 1990 года.
С 1991 года служил во Внутренних Войсках СССР инструктором по служебному собаководству. После окончания службы в армии сдал экзамен на инструктора по собаководству в Харьковском региональном кинологическом центре служебного собаководства.
Закончил Харьковский зооветеринарный институт (сейчас - Харьковская зооветеринарная академия). С 2001 года занимается исследованиями в области криоконсервирования сперматозоидов собак, которые были начаты с целью сохранения породы ЮРО.
После зачисления в аспирантуру института криобиологии и утверждении темы по исследованию механизмов повреждения спермиев собак при криоконсервировании получил поддержку от группы сотрудников, пытавшихся еще 12 лет назад начать такие же исследования. В результате образовалась рабочая группа из 4-х человек, которая сейчас и занимается всем спектром вопросов, связанных с этой темой.
В группу входят: Линник Тамара Павловна (доктор биол. наук), Новиков Александр Николаевич (кандидат биол. наук),
Дюбко Татьяна Станиславовна (кандидат биол. наук).
Руководством института поддерживается идея создания банка спермы ЮРО на базе существующего (в институте) криобанка.
Приглашаются к сотрудничеству все заинтересованные лица - кинологи, заводчики, владельцы питомников и просто владельцы собак.
e-mail: cryomax@mail.ru
На первых этапах разработки методов криоконсервирования сперматозоидов собак был взят за основу метод, используемый для криоконсервации сперматозоидов быков.
Впервые щенки после оплодотворения криоконсервированной спермой были получены в 1969 году Зигером, который адаптировал предложенный Нагаси и Нивой метод криоконсервации бычьих сперматозоидов. В 1973 году этот метод, но только с использованием в качестве хладогента жидкого азота, был опробован вторично и после хранения криоконсервированных СС в течение 1 года был получен 21 здоровый щенок. В дальнейшем были выявлены значительные отличия в криоустойчивости сперматозоидов собак и быков, проводились работы по подбору оптимальных сред для разбавления клеток перед криоконсервацией, режимов охлаждения и множества других составляющих технологии. Однако, несмотря на то, что во многих крупных ветеринарных центрах развитых стран уже созданы криобанки сперматозоидов собак, до сих пор существует целый ряд нерешенных вопросов в отношении технологии замораживания и последующего использования оттаянных клеток.
Сохранность клеток после отогрева остается невысокой - по данным разных авторов она не превышает 25 - 40 % живых, способных к оплодотворению клеток, в сравнении с таковыми до замораживания. Количество щенков, рождающихся после оплодотворения самок криоконсервированной спермой в одном помете (многоплодие) уступает числу щенков при использовании обычной вязки. Определение сроков осеменения самок криоконсевированной спермой (точное время созревание яйцеклеток и готовность их к оплодотворению) требует проведение гормональных тестов на концентрацию прогестерона и других гормонов плазмы крови эстральной (течной) суки. Проведение таких тестов обусловлено необходимостью синхронизировать время созревания яйцеклетки и поступление замороженно-оттаянных сперматозоидов в матку ввиду ограниченного времени функционирования спермиев после отогрева.
Поиск технических решений, которые позволили бы увеличить процент выживших после оттаивания сперматозоидов собак ведется и в Украине. В Харькове, на базе Института проблем криобиологии и криомедицины начиная с 2001 года были предприняты попытки вначале воспроизвести уже известные методы, а когда они оказались не достаточно эффективными, разработать свой метод. Коротко остановлюсь на уже сделанном. Одной из проблем, возникающей при криоконсервировании сперматозоидов собак, является несовершенство криозащитных сред. Две составляющие, а именно желток куриных яиц и непосредственно криопротектор (т. е. вещество, предохраняющее клетки от повреждения при замораживании), входят во все известные криозащитные среды, применяемые на спермиях собак. Концентрация различных веществ в составе желтка куриных яиц значительно варьирует в зависимости от состояния кур-несушек, поэтому говорить о каком-либо стандартном составе криозащитной среды не приходится. Кроме того, желток, как прекрасная среда для инкубирования разного рода бактерий, может быть переносчиком инфекций при искусственном осеменении самок, если клетки после оттаивания не отделять от него. Отмывка клеток после оттаивания (отделение от компонентов криозащитной среды) влечет за собой дополнительные повреждения сперматозоидов. Предпринимались попытки замены желтка обезжиренным молоком, но, по всей видимости это не принесло желаемых результатов. Еще один путь замены желтка, исследованный в большей степени на спермиях других видов млекопитающих и не получивший продолжения на собаках, заинтересовал нас больше. Использование в криозащитных средах низкомолекулярных белков в технологиях замораживания половых клеток других видов животных имело часто положительный эффект, но на спермиях собак этот эффект показан не был. Нам удалось подобрать такой состав и концентрацию белков, который давал возможность сохранять подвижными после оттаивания количество клеток, превышающее процент сохранности их в присутствии желтка. При этом, время, в течение которого клетки оставались подвижными после оттаивания удалось увеличить как за счет применения белков, так и за счет использования криопротектора, более эффективного и менее токсичного, чем применяемый на спермиях собак глицерин.
Таким образом, использование нашей технологии дает возможность сохранять высокий процент подвижных клеток (около половины от всей подвижной фракции), что достаточно для осеменения.
В данный момент наши усилия направлены на проведение пробных осеменений с целью проверить эффективность созданной технологии. Для этого совместно с Харьковской государственной зооветеринарной академией весной этого года намечается серия экспериментов по оплодотворению самок замороженно-оттаянной спермой. Мы с надеждой ждем результатов. В планах - разработка переносного замораживателя для спермы собак с целью использования его в полевых условиях.
В завершение хотелось бы сказать о том, что итогом всей работы могло бы стать создание генофонда такой прекрасной породы собак как южнорусская овчарка, на базе существующего в нашем институте криобанка. Для кинологов не новость, что эта порода находится на грани исчезновения. Сохранение ее благодаря единичным существующим сегодня питомникам, маловероятно. К сожалению, наши научные разработки могут так и остаться,как говориться, «на полке». На сегодня бюджет государственного института не позволяет провести экспедицию по накоплению спермодоз «южака» в регионах, где эта порода еще сохранилась. Остается надеяться только на энтузиастов породы и возможную помощь от клубов собаководства. В тоже время, национальный статус криобанка нашего института и известность его за рубежом, может быть гарантом того, что на долгие годы удастся сохранить криоконсервированные половые клетки южнорусской овчарки и воспроизвести эту породу в случае ее окончательного исчезновения.
Есть несколько способов искусственного оплодотворения (ИО), это и непосредственно от собаки к собаке, свежей охлажденной спермой и замороженной спермой.
......Техника ИО включает
• вагинальное введение,
• хирургическую имплантацию непосредственно через стенку матки, если невозможен путь введения через шейку,
• и трансцервикальное (через шейку матки непосредственно в матку) оплодотворение.
......Но перед оплодотворением необходимо убедиться в качестве семени, будь то свежая сперма, охлажденная или замороженная, тогда вероятность получения больше плодного помета будет достаточно велика, тем более, если сперма будет введена непосредственно в матку, особенно с трансцервикальной техникой. Тут надо отметить, что даже свежее и свеже-охлажденное семя дает более скромный результат при вагинальном введении.
......Трансцервикальное осеменение производится при помощи Жесткого эндоскопа или «Норвежского катетера» (Norwegian catheter).
......Жесткий эндоскоп более широко используется в практике, чем Норвежский катетер, и имеет значительное преимущество для обеспечения точности введения. При его использование владелец суки может наблюдать фактическое введение спермы непосредственно в матку посредством монитора.
......При использовании Норвежского катетера также возможно получить отличные результаты, но при работе с ним требуется более квалифицированного специалиста. Здесь важно аккуратно и точно вести катетер через шейку матки, проведение процедуры осложняется при излишнем ожирении у суки. Трансцервикальное введение спермы не требует седатации практически во всех случаях.
......Важное различие между трансцервикальным оплодотворением и хирургической имплантацией, очевидно, что трансцервикальный путь не влечет за собой риск общей анестезии и хирургического вмешательства. Если есть патологические изменения матки не стоит сразу же оперировать собаку. Многие аномалии становятся понятными через гормональные исследования, и могут быть вылечены медицинским способом, а не хирургическим. Если ткани матки или яичников - измененные, хорошо бы провести заранее обследование суки прежде, чем она будет в течке.
......Из-за различий в способах подготовки семени к оплодотворению очевидно, что свежесобранное семя и оплодотворение им дает наилучший результат.
......Способы сохранения свежеохлажденного семени разработаны уже давно и дают успешные результаты, но не настолько хорошие по статистике, как свежесобранного семени и оплодотворение им. Наихудшая статистика при использовании замороженной спермы, независимо от способа заморозки. А причина этого то, что при размораживании сперма остается живая и активная только от двух до двенадцати часов. А со свежей или охлажденной спермой разговор идет о днях, а не о часах жизнеспособности сперматозоидов. Из-за этого различия, замороженную сперму необходимо использовать только прямым внутриматочным введением, и трансцервикальное введение должно быть предпочтительным перед хирургической имплантацией. Из этого следует, что синхронизация овуляции и введения замороженного семени чрезвычайно критичны, в то время как на введение свежей или свежезамороженной спермы есть более расширенные временные интервалы.
......Так что для достижения максимально положительного результата по возможности надо использовать все-таки свежую или охлажденную сперму, конечно при условии, что кобель все еще живой и полноценный, как производитель.
Существует много способов оценки готовности суки
к оплодотворению. ......Опытный и надежный нос кобеля-производителя часто является прекрасным инструментом для этого.
......Мазок, который правильнее назвать вагинальной цитологией, должен быть правильно прочитан опытным ветеринаром и это лучше производить ежедневно или хотя бы через день, начиная с 8 дня течки.
......Следующий шаг, возможность, которой может воспользоваться менее опытный ветеринар, это тест крови на содержание прогестерона. Рзультат можно получить и на следующий день после взятия пробы.
......Определение даты осеменения очень важно в случае использования замороженного семени или охлажденного. В случае использования свежего семени ИО производят, как при обычной вязке, первый раз в день овуляции и контрольно через день. При использовании замороженной спермы, активность которой значительно снижена из-за замораживания и размораживания, и жизнеспособность таких сперматозоидов длится несколько часов, а не суток как у свежего семени, осеменение осуществляют на второй-третий день после овуляции. Анализ крови на прогестерон служит хорошим индикатором овуляции. Прогестерон является единственным гормоном, концентрацию которого используют как ориентир при вычислении сроков осеменения.
Сбор спермы и ее хранение. Забор спермы производится по ряду причин:
С целью оценки ее количественных и качественных характеристик;
Для последующего осеменения суки, когда естественное скрещивание не возможно по каким- либо причинам;
С целью получения большего объема семени при проведении оплодотворения суки;
С целью хранения;
А также из-за законодательных ограничений, например, из- за карантинных требований. Для того, чтобы получит сперму целесообразно возбудить кобеля присутствием либо запахом течной суки. Эякуляция обычно происходит в виде нескольких дискретных сокращений и семя собирается в стерильную пробирку, входящую в резиновый шланг, надетый на пенис кобеля.
Эякулят имеет три четко различимые фракции:
сильно пахнущая первая фракция прозрачна и представляет собой продукт работы мускусных желез в уретре.
полупрозрачная вторая фракция выделяется яичками кобеля и содержит сперматозоиды.
третья прозрачная фракция обычно наибольшая по объему и представляет собой секрет предстательной железы.
Проводятся тесты на качественные и количественные характеристики собранной семенной жидкости. Под микроскопом оценивается концентрация, подвижность и соотношение живых к мертвым сперматозоидов, а также их размер и форма. Свежая, неразбавленная сперма может использоваться для немедленного искусственного оплодотворения.
После того, как получена оценка спермы от «отлично» до «хорошо», сперма либо просто охлаждается, либо дополнительно подвергается замораживанию. В обоих случаях используются специальные субстанции, называемые консервантами с целью сохранения качества семени.
Свежая, ничем не обработанная сперма сохраняет свою способность к оплодотворению от 24 до 48 часов. Этот срок может быть продлен если используется охлаждение семени совместно с консервантом. Жизнеспособность сперматозоидов может быть сохранена на неопределенно долгий срок, если используется метод глубокой заморозки.
Подготовка к оплодотворению.
Проводится процедура по размораживанию спермы. Считается, что для успешного оплодотворения суки достаточно от 100 до 300 миллионов сперматозоидов. Производится оценка размороженного семени. Если подвижность и количество сперматозоидов признаются удовлетворительными, сперма вводится во влагалище либо шейку матки суки. Рекомендуется по крайней мере два сеанса по оплодотворению с промежутком между ними от 24 до 48 часов.
Долгосрочные преимущества использования замороженной спермы.
В условиях наличия карантинных ограничений нет необходимости выдерживать суку до нескольких месяцев, соблюдая их. Нет необходимости в перелетах. Семя может просто пересылаться в специальных контейнерах на длительные расстояния.
Также замороженная сперма позволяет оптимально синхронизировать процедуру оплодотворения суки с ее пиком готовности к вязке.
Программа разведения поддается большему планированию, так как убирается большое количество неопределенности, связанное со сроками транспортировки суки, визовыми ограничениями и доступностью подобранного кобеля.
Важно, что одобрение искусственного оплодотворения сук было имело место в стране, географическая протяженность которой сравнима с Россией. Также важен экономический аспект. Транспортировка нескольких доз спермы обходится значительно дешевле по сравнению с полетом суки немецкого дога туда и обратно. Также владелец суки получает несравнимо больший выбор в плане выбора партнера по вязке, так как отсутствуют такие барьеры, как таможенный контроль, ветеринарный контроль и визовые ограничения. Кроме того, сука не подвергается излишнему стрессу и кардинально уменьшается риск передачи венерических заболеваний. При стоимости вязки в Германии превышающей 1500 Евро (оплата кобеля и расходы на транспортировку), стоимость транспортировки замороженной спермы не превысит 300 Евро плюс оплата за дозу спермы.
Исследование путей сохранения жизнеспособности спермы собаки спонсировалось АКС. На момент одобрения практики применения искусственного осеменения было признано, что качество спермы кардинально падало с увелечением сроков хранения. При этом в случае оплодотворения свежим семенем, процент наступления беременности оказывался на порядок выше. Для сравнения, степень сохранения качества спермы крупного рогатого скота практически не зависит от сроков хранения.
Практика применения искусственного осеменения крупного рогатого скота, овец и свиней была широко распространена в СССР с середины 30-х годов. Семя хранилось в течение нескольких дней. Прорыв в сохранении семенного материала был сделан в 1951 году, когда опытном путем установили, что жизнеспособность сохраняется при условии замораживания и хранения при температуре -79 градусов по Цельсию.
Позднее использовался жидкий водород и семя хранилось при температуре -196 градусов. Телята рождались и при оплодотворении спермой, которая хранилась свыше 10 лет и есть все основания утверждать, что этот срок может быть значительно продлен.
Современное состояние дел в сохранении способности к оплодотворению спермы собак не настолько успешно как в случае с сельскохозяйственными животными.
Преимущества использования замороженного семени были перечислены в American Kennel Gazette, июнь 1981 года: 1. Использование замороженной спермы позволит исключить дорогостоящие, требующие времени и нередко просто небезопасные перелеты и переезды с течной сукой. Подобные перевозки не только увеличивают риск заболевания и травмирования суки, но могут привести к ее смерти. Еще более проблемным становится вязка сук с введением ряда авиакомпаний ограничений в 80 фунтов на вес собак, которое принимаются к транспортировке в период праздников, сезоны отпусков и при неблагоприятных погодных условиях.
2. Замороженная сперма позволяет экономить деньги заводчика, так как может храниться достаточно долго и за небольшие деньги.
3. Замороженная сперма ведет к исключению ситуаций, когда владелец кобеля вынужден нести ответственность за встречу, размещение и сам процесс вязки чужой суки, направленной без сопровождения.
4. Замороженная сперма значительно облегчает нагрузку на владельца племенного кобеля. Падают затраты времени и нет необходимости контактировать с чужими собаками. В результате на рынке может оказаться больше племенных производителей, так как перед владельцами встают чисто технические, а не эмоциональные проблемы.
5. Замороженная сперма позволяет контролировать распространение венерических заболеваний, случающееся во время вязки. Также распространение бруцеллеза собак может подтолкнуть владельцев к более широкому использованию искусственного осеменения, свежей или замороженной спермы.
6. Выдающие производители могут оставаться таковыми несмотря на полученные травмы и увечья, которые препятствуют естественному спариванию. Также большее количество сук может быть оплодотворено одним производителем при прочих равных условиях.
7. Банки замороженной спермы позволяют владельцам собак, проживающих в глубинке, пользоваться услугами выбранного кобеля, а не того, кто географически доступен. Также сперма для банка может быть сохранена в период, когда кобель активно не используется.
8. Доставка замороженной спермы исключает необходимость получать ветеринарные сертификаты на суку.
9. Процесс отбора спермы может производится владельцем кобеля тогда, когда удобно ему, не препятствуя каникулам, праздникам и отпускам.
10. Замороженная сперма позволяет продлить период использования чемпионов пород, требующих наличия сертификатов по дрессировке и полевым испытаниям. Нередко получение таких сертификатов завершается к 4-6 годам, когда большинство животных уже не находятся в наилучшей физической форме для производства потомства. Важно отметить необходимость сбора спермы в период физического расцвета до того, как собака завершит свое чемпионство. Также важно отметить, что ни одна собака, полученная в результате искусственного оплодотворения замороженной спермой, не имела дефектов, которые можно было бы однозначно связать с процессом заморозки.
11. Использование замороженного семени позволяет использовать производителей, которые умерли на дату проведения осеменения.
12. Еще одним доводом в пользу замороженного семени является возможность эффективного тестирования препотентности производителя, которое широко используется в племенной работе с сельскохозяйственными животными. У собак тестирование препотентности практически не использовалось ввиду недостаточности наблюдений для статистического исследования степени экспрессивности того или иного признака у производителя.
13. Использование замороженного семени во многом облегчает создание кровных линий и имбридинга, которое было бы невозможно при других условиях. Подобное разведение при условии генетического консультирования может резко улучшить получаемые результаты.
14. Замороженная сперма позволяет сохранять модели животных при использовании больших колоний в медицинских и научных исследованиях.
Сбор спермы и ее хранение.
Забор спермы производится по ряду причин: - С целью оценки ее количественных и качественных характеристик;
- Для последующего осеменения суки, когда естественное скрещивание не возможно по каким- либо причинам;
- С целью получения большего объема семени при проведении оплодотворения суки;
- С целью хранения;
- А также из-за законодательных ограничений, например, из- за карантинных требований.
Для того, чтобы получит сперму целесообразно возбудить кобеля присутствием либо запахом течной суки. Эякуляция обычно происходит в виде нескольких дискретных сокращений и семя собирается в стерильную пробирку, входящую в резиновый шланг, надетый на пенис кобеля.
Эякулят имеет три четко различимые фракции: - сильно пахнущая первая фракция прозрачна и представляет собой продукт работы мускусных желез в уретре.
- полупрозрачная вторая фракция выделяется яичками кобеля и содержит сперматозоиды.
- третья прозрачная фракция обычно наибольшая по объему и представляет собой секрет предстательной железы.
Проводятся тесты на качественные и количественные характеристики собранной семенной жидкости. Под микроскопом оценивается концентрация, подвижность и соотношение живых к мертвым сперматозоидов, а также их размер и форма. Свежая, неразбавленная сперма может использоваться для немедленного искусственного оплодотворения.
После того, как получена оценка спермы от «отлично» до «хорошо», сперма либо просто охлаждается, либо дополнительно подвергается замораживанию. В обоих случаях используются специальные субстанции, называемые консервантами с целью сохранения качества семени.
Свежая, ничем не обработанная сперма сохраняет свою способность к оплодотворению от 24 до 48 часов. Этот срок может быть продлен если используется охлаждение семени совместно с консервантом. Жизнеспособность сперматозоидов может быть сохранена на неопределенно долгий срок, если используется метод глубокой заморозки.
Подготовка к оплодотворению. Проводится процедура по размораживанию спермы. Считается, что для успешного оплодотворения суки достаточно от 100 до 300 миллионов сперматозоидов. Производится оценка размороженного семени. Если подвижность и количество сперматозоидов признаются удовлетворительными, сперма вводится во влагалище либо шейку матки суки. Рекомендуется по крайней мере два сеанса по оплодотворению с промежутком между ними от 24 до 48 часов.
Долгосрочные преимущества использования замороженной спермы. В условиях наличия карантинных ограничений нет необходимости выдерживать суку до нескольких месяцев, соблюдая их. Нет необходимости в перелетах. Семя может просто пересылаться в специальных контейнерах на длительные расстояния.
Также замороженная сперма позволяет оптимально синхронизировать процедуру оплодотворения суки с ее пиком готовности к вязке.
Программа разведения поддается большему планированию, так как убирается большое количество неопределенности, связанное со сроками транспортировки суки, визовыми ограничениями и доступностью подобранного кобеля.
- участник сейчас на форуме
- участник вне форума